1853年，中國爆發太平天國運動，太平軍定都南京。由於這場運動具有基督教色彩，西方國家和一些在華傳教士期望能夠將基督教傳遍中華大地。於是，大英聖書公會在9月進行大規模籌款，發起「在華分發一百萬本聖經」運動（Million Testaments for China）。其實，早在中國內地向傳教士開放前，一些傳教士希望《聖經》不單翻譯成文言語體，也望能夠翻譯成淺白易懂的官話形式。所以，倫敦會傳教士麥都思（Walter Henry Medhurst，1796-1857）看到了太平天國這場運動的契機，計劃把《聖經》翻譯成以南京官話口語為主的中文譯本。此外，麥都思可以藉此取代被天平天國採用的1836年郭實臘（Karl Friedrich August Gützlaff，1803-1851）譯本的修訂本。
繼《委辦譯本》完成后，麥都思與施敦力（John Stronach，1810-1888）按照他們的原則，督導一個南京人根據《委辦譯本》新約的文言語體譯成了《南京官話譯本》。此譯本不是創造一種新的官話文學形式，而是引入了某些非常口語化的短語，并作出一些音譯的改變以及運用一些中國成語，使其更加口語化。
《南京官話譯本》是新教第一部官話新約譯本，雖然有人認為其譯文不太準確，但是它被視為開路先鋒，對日後新教的中文聖經翻譯方向有極為深遠的影響。特別是《北京官話譯本》的翻譯過程使用了此譯本進行參照，而《和合本》的翻譯則採用它和其他譯本作為基礎譯本進行比較。1854年，《南京官話譯本》獲得大英聖書公會授權印行了十萬冊。1857年至1884年間，此譯本多次改版重印；內地會也曾經出版過一部用羅馬拼音文字印刷的路加福音版本，只供內地會的教會使用。
